說(shuō)到HPV檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，HC2技術(shù)？沒(méi)錯(cuò)。

但我們今天聊的是HPV分型的標(biāo)準(zhǔn)。

Luminex技術(shù)，是的。

憑什么？

隨著HPV感染和宮頸腫瘤之間的直接因果關(guān)系被證實(shí)，HPV檢測(cè)已經(jīng)成為宮頸癌防治的重要部分。HPV DNA檢測(cè)以其高敏感性、高陰性預(yù)測(cè)值等特點(diǎn)，在預(yù)防宮頸癌上發(fā)揮重大的作用，提供更多的保護(hù)。從檢測(cè)的型別來(lái)看，HPV檢測(cè)主要有以下4種：

數(shù)十年的發(fā)展，隨著對(duì)HPV認(rèn)識(shí)與研究的深入，HPV檢測(cè)從不分型到16/18部分分型，16/18部分分型到拓展分型，再到全分型，同時(shí)也滿足不同區(qū)域，不同人種在型別上的差異。
2015年，全球商業(yè)化HPV核酸檢測(cè)試劑超過(guò)193個(gè)[1]；
2020年，僅在我國(guó)獲得NMPA認(rèn)證的HPV核酸檢測(cè)試劑就有88個(gè)（效期內(nèi)）。
HPV檢測(cè)試劑眾多，方法學(xué)各異，有熒光PCR法，流式熒光雜交，反向點(diǎn)雜交，等溫?cái)U(kuò)增，芯片法，測(cè)序…，如何對(duì)不同方法學(xué)的HPV檢測(cè)試劑進(jìn)行驗(yàn)證，保證其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，尤其是其分型的準(zhǔn)確性。我們看看WHO的選擇。

WHO HPV 實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)（WHO HPV Laboratory Network）

由WHO發(fā)起，比爾和梅琳達(dá)·蓋茨基金會(huì)資助，其合作機(jī)構(gòu)包括PATH（非政府衛(wèi)生組織）、哈佛大學(xué)、IARC（國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)）、ICO（加泰羅尼亞癌癥研究所）、日內(nèi)瓦WHO等。

WHO HPV實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)（WHO HPV Laboratory Network）以“協(xié)調(diào)和標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)程序，并在全世界建立一個(gè)HPV實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)”為目標(biāo)之一，以支持對(duì)區(qū)域疾病負(fù)擔(dān)進(jìn)行一致的實(shí)驗(yàn)室評(píng)估，并監(jiān)測(cè)HPV疫苗的性能。

2014年，全球參考實(shí)驗(yàn)室（Global Reference Laboratory，GRL）基于Luminex分型對(duì)PP（標(biāo)準(zhǔn)品）進(jìn)行了預(yù)測(cè)試。
德國(guó)癌癥研究中心作為外部實(shí)驗(yàn)室，同樣采用Luminex分型技術(shù)對(duì)PP進(jìn)行了再次預(yù)測(cè)試。

2017年，全球參考實(shí)驗(yàn)室（GRL）基于Luminex分型對(duì)PP進(jìn)行了預(yù)測(cè)試。

為什么Luminex分型能夠得到WHO的認(rèn)可，作為HPV分型的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，Luminex技術(shù)有何獨(dú)特之處？我們來(lái)了解一下吧。

Luminex核心技術(shù)之一為xMAP技術(shù)。1997年，《臨床化學(xué)》雜志刊登專文介紹Luminex xMAP技術(shù)，并將其譽(yù)為“真正的臨床應(yīng)用型生物芯片”。隨后，運(yùn)用Luminex xMAP技術(shù)進(jìn)行臨床診斷和基礎(chǔ)研究成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)，相關(guān)的研究論文頻頻刊登在《臨床化學(xué)》 《臨床與診斷免疫學(xué)》 《臨床微生物》 《基因組研究》 《蛋白質(zhì)組研究》 《癌癥》等國(guó)際權(quán)威學(xué)術(shù)雜志上。被國(guó)際業(yè)界專家評(píng)價(jià)為臨床診斷的趨勢(shì)性技術(shù)之一。
2005年11月，為表彰其對(duì)臨床診斷技術(shù)進(jìn)步做出的貢獻(xiàn)，全球科技產(chǎn)業(yè)、行業(yè)研究的權(quán)威機(jī)構(gòu)—Frost & Sullivan―授予xMAP技術(shù)“2005年度國(guó)際臨床診斷技術(shù)革新大獎(jiǎng)”，標(biāo)志著 Luminex xMAP技術(shù)在國(guó)際臨床診斷技術(shù)領(lǐng)域的地位得到了最具權(quán)威的認(rèn)可。

     xMAP技術(shù)     

在國(guó)內(nèi)又稱為“液相懸浮芯片技術(shù)”、“多功能流式點(diǎn)陣技術(shù)”、“液相芯片分析技術(shù)”、“流式熒光檢測(cè)技術(shù)”、“多功能多指標(biāo)并行分析技術(shù)”、“（微球）懸浮陣列技術(shù)”等。

它有機(jī)整和了熒光編碼微球技術(shù)、激光分析技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)、高速數(shù)字信號(hào)處理技術(shù)、計(jì)算機(jī)運(yùn)算法則等多項(xiàng)最新科技成果，具有自由組合、高通量、高速度、低成本、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍廣、無(wú)需洗滌、操作簡(jiǎn)便、在同一平臺(tái)上即可完成蛋白質(zhì)和核酸的檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，代表著生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展方向。

其技術(shù)原理為用不同配比的兩種顏色分類熒光染料將直徑為5.6 微米的聚苯乙烯微球染成不同的熒光色，從而獲得多達(dá)100種熒光編碼的微球。把針對(duì)不同待測(cè)物的抗體分子或者基因探針以共價(jià)交聯(lián)的方式結(jié)合到特定的編碼微球上，每個(gè)編碼微球都對(duì)應(yīng)相應(yīng)的檢測(cè)項(xiàng)目。先把針對(duì)不同待測(cè)物的熒光編碼微球混合，然后加入待測(cè)物質(zhì)或者待測(cè)的擴(kuò)增片段，所形成的復(fù)合物再與標(biāo)記熒光素發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。

微球在流動(dòng)鞘液的帶動(dòng)下單列逐顆依次通過(guò)紅綠激光，紅激光用來(lái)判定微球的熒光編碼，綠激光用來(lái)測(cè)定微球上報(bào)告分子的熒光強(qiáng)度。從而達(dá)到快速準(zhǔn)確的定量檢測(cè)目的。

  技術(shù)平臺(tái)優(yōu)勢(shì)     

速度/高通量：每個(gè)微球都是一個(gè)單獨(dú)的測(cè)試，因此可以用有限的樣本同時(shí)進(jìn)行大量不同的生物測(cè)定和分析。30s即可對(duì)1個(gè)樣本完成27種HPV亞型的分析，對(duì)每個(gè)樣本中的每個(gè)亞型均完成50次以上的檢測(cè)分析。

應(yīng)用廣泛：基于xMAP技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)多種不同的應(yīng)用，包括核酸、抗原抗體結(jié)合、酶、受體和其他蛋白質(zhì)相互作用。如HPV DNA，腫瘤標(biāo)志物，TORCH等。

精確性：?jiǎn)喂芊磻?yīng)， xMAP技術(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行實(shí)時(shí)分析和精確量化。

重現(xiàn)性：在一個(gè)批次內(nèi)大量生產(chǎn)xMAP微球，允許在分析生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行分析標(biāo)準(zhǔn)化和可選的多重質(zhì)量控制（QC）步驟，這是固相平面陣列無(wú)法提供的。
同行信賴：來(lái)自科學(xué)同行的50,000多篇出版物，涵蓋了廣泛的研究領(lǐng)域。

多個(gè)國(guó)際HPV試劑品牌采用Luminex分型驗(yàn)證其HPV分型的特異性。

1. 羅氏[2]：HPV16/18分型試劑盒，采用Luminex基因分型為對(duì)照，評(píng)價(jià)了Cobas 4800 HPV型別的特異性。

2.美國(guó)碧迪[3]：HPV高危拓展分型試劑盒，采用Luminex基因分型為對(duì)照，評(píng)價(jià)了BD onclarity HPV檢測(cè)的型別特異性。

3. 德國(guó)艾迪[4]：HPV全分型試劑盒，PCR+雜交檢測(cè)，29種HPV亞型，采用Luminex進(jìn)行多重基因分型（MPG）對(duì)試劑HPV分型進(jìn)行驗(yàn)證。

透景生命在2003年將Luminex核心技術(shù)xMAP?技術(shù)引入中國(guó)，立足國(guó)內(nèi)大樣本人群研究數(shù)據(jù)，研發(fā)并推出了“人乳頭瘤狀病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒”，一管反應(yīng)，對(duì)27種HPV亞型進(jìn)行分型檢測(cè)。立足本土國(guó)情，國(guó)際認(rèn)可的HPV分型檢測(cè)技術(shù)，你不來(lái)試試嗎？

參考文獻(xiàn)：

[1] Mario Poljak, Bo?tjan J. Kocjan, Anja O?trbenk,等. Commercially available molecular tests for human papillomaviruses (HPV): 2015 update[J]. Journal of Clinical Virology, 2016.[2] Clinical validation of the Cobas 4800 HPV assay using cervical samples in SurePath medium under the VALGENT4 framework. Journal of Clinical Virology.2020, 128. 104336.[3] Clinical and analytical performance of the BD Onclarity HPV assay with SurePath screening samples from the Danish cervical screening program using the VALGENT framework. J Clin Microbiol.2020, 58:e01518-19.[4] Analytical Evaluation of the Human Papillomavirus HPV DNA Array E1-Based Genotyping Assay. Intervirology.2019, 62. 1-1