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核酸檢測實驗室污染原因及處理方...

核酸檢測實驗室污染原因及處理方案

發(fā)布日期:2021-02-20 作者: 點擊:

目前國內(nèi)所有二級以上綜合醫(yī)院都具備了核酸檢測能力,大部分醫(yī)院也設(shè)立了PCR實驗室,高強度的核酸檢測任務(wù)已然成為了我們檢驗人的工作常態(tài),但是,如果一旦出現(xiàn)實驗室污染,可能會造成假陽性結(jié)果,導(dǎo)致結(jié)果不可信,甚至可能會危及實驗室工作人員安全。


應(yīng)對核酸檢測實驗室污染的最好辦法就是防范于未然,今天就帶大家了解一下實驗中我們?nèi)绾伪苊夂蜏p少污染的產(chǎn)生以及處理污染。


一、污染的產(chǎn)生


在新冠病毒核酸檢測過程中 ,常見以下幾種污染類型 :擴 增片段的污染 ( 產(chǎn)物污染 ) ;天然基因組 DNA 的污染、試劑 污 染 ( 貯存液或工作液 ) 以及樣本間交叉污染 。核酸檢測實驗室 污染的主要來源是擴增產(chǎn)物的污染 。


圖片

實驗室應(yīng)通過以下途徑及時發(fā)現(xiàn)污染 :


1、采用每次檢測過程至少3個陰性對照隨機置于臨床樣本中間參與提取全過程。


2、每天對實驗室內(nèi)空氣進行采樣監(jiān)測??諝獗O(jiān)測范圍應(yīng)至少應(yīng)包括樣本制備區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。


3、定期對實驗室臺面、門把手、儀器設(shè)備表面進行取樣監(jiān)測。


4、陽性樣本采用另外一到兩種更為靈敏且擴增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始樣本進行復(fù)核檢測。


二、污染的防控


01嚴格實驗室功能分區(qū)


原則上新冠病毒核酸檢測實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。


根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當(dāng)是完全相互獨立的。傳遞窗滿足密封性要求,不能有空氣的直接相通。各項檢測工作應(yīng)嚴格按相應(yīng)規(guī)定在各自的區(qū)域內(nèi)進行,嚴禁在樣本制備區(qū)配制試劑。


各區(qū)的功能是:


1、試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū):貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的制備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。


2、樣本制備區(qū):轉(zhuǎn)運箱的開啟,樣本的滅活(適用時),核酸提取及其加入至擴增反應(yīng)管等。


3、擴增和產(chǎn)物分析區(qū):核酸擴增和產(chǎn)物分析。


02確保實驗室人、物及空氣單向流動


核酸檢測實驗室的人、物及空氣流向按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴增和產(chǎn)物分析區(qū),防止擴增產(chǎn)物隨人流、物流及空氣進入擴增前的區(qū)域。空氣流向應(yīng)按照從試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行。


03實驗室檢測安全管理


(1)基本要求


核酸檢測應(yīng)當(dāng)在生物安全二級實驗室進行,并應(yīng)在生物安全風(fēng)險評估的基礎(chǔ)上,采取適當(dāng)?shù)膫€體防護措施,包括手套、口罩和隔離衣等。開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當(dāng)制定實驗室生物安全相關(guān)程序文件及實驗室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序,并有記錄。


(2)實驗室前安全要求


應(yīng)使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行桌面、臺面及地面消毒。消毒液需每天新鮮配制,不超過24小時。轉(zhuǎn)運至實驗室的標(biāo)本轉(zhuǎn)運桶應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開啟。轉(zhuǎn)運桶開啟后,使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對轉(zhuǎn)運桶內(nèi)壁和標(biāo)本采集密封袋進行噴灑消毒。取出標(biāo)本采集管后,應(yīng)首先檢查標(biāo)本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物。確認無滲漏后,推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表面(此處不建議使用75%酒精,以免破壞標(biāo)本標(biāo)識)。如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)立即用吸水紙覆蓋,并噴灑有效氯含量為0.55%的含氯消毒劑進行消毒處理,不得對標(biāo)本繼續(xù)檢測操作,做好標(biāo)本不合格記錄后需立即進行密封打包,壓力蒸汽滅菌處理后銷毀。


如為采樣管為非滅活管,實驗室操作人員在進行標(biāo)本熱滅活時,溫浴前需旋緊標(biāo)本采集管管蓋,必要時可用封口膜密閉管蓋;溫浴過程中可每隔10分鐘將標(biāo)本輕柔搖勻1次,以保證標(biāo)本均勻滅活;溫浴后標(biāo)本需靜置至室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降,隨后再開蓋進行后續(xù)核酸提取。


(3)核酸提取和檢測安全要求


標(biāo)本進行核酸提取和檢測時應(yīng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進行操作。如為打開標(biāo)本管蓋或其他有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作,則必須在生物安全柜內(nèi)進行。


(4)實驗室結(jié)束后清潔要求。


需要對實驗室環(huán)境進行清潔,消除可能的核酸污染。


①實驗室空氣清潔。實驗室每次檢測完畢后,可采用房間固定和/或可移動紫外燈進行紫外照射2小時以上。必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核酸。


②工作臺面清潔。每天實驗后,使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行臺面、地面清潔。


③生物安全柜消毒。實驗使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中,包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面。手消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實驗室廢棄物轉(zhuǎn)運袋中。試管架、實驗臺面、移液器等使用75%酒精進行擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜,紫外燈照射30分鐘。


④轉(zhuǎn)運容器消毒。轉(zhuǎn)運及存放標(biāo)本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。


⑤塑料或有機玻璃材質(zhì)物品清潔:使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑。


(5)轉(zhuǎn)運容器消毒


轉(zhuǎn)運及存放樣本的容器使用前后需使用有效氯含量為0.2%的消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。


04強化實驗室檢測過程控制


實驗室接到樣本后,應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對樣本進行清點核對。按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行試劑準(zhǔn)備、樣本前處理、核酸提取、核酸擴增、結(jié)果分析及報告。實驗室應(yīng)當(dāng)建立可疑樣本和陽性樣本復(fù)檢的流程。


(1)試劑準(zhǔn)備


應(yīng)當(dāng)選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑,并在選擇樣本采樣管和核酸提取試劑時,使用試劑盒說明書上建議的配套樣本采樣管和提取試劑。


(2)樣本滅活


已經(jīng)使用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的實驗室,這一環(huán)節(jié)無需進行滅活處理,直接進行核酸提取。使用非滅活型樣本采樣管的實驗室,可采用56℃孵育30分鐘熱滅活的處理方式。


(3)核酸提取


將滅活后的樣本取出,在生物安全柜內(nèi)打開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后,立即將提取物進行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸力口至PCR擴增反應(yīng)體系中。


(4)核酸擴增


將擴增體系放入擴增儀,核對擴增程序是否與試劑說明書相符,啟動擴增程序。擴增后的反應(yīng)管不要開蓋,直接放于垃圾袋中,封好袋口,按一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理。


三、污染的消除


實驗室一旦發(fā)生污染,檢測工作應(yīng)立即停止,直到確認消除污染后才能重新開始檢測。首先,要查找污染源和明確污染范圍。然后,根據(jù)污染源和污染范圍采取有效的去污染措施,結(jié)合各種不同方法以達到最佳效果。


實驗室污染的處理:


1.標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時:


立即用吸水紙覆蓋,并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配,24小時內(nèi)使用。


2.標(biāo)本傾覆造成實驗室污染時:


保持實驗室空間密閉,避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時(如大量溢撒時)可用過氧乙酸加熱熏蒸實驗室,劑量為2g/m3,熏蒸過夜;或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧,用量8ml/m3,作用1-2小時;必要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸:高錳酸鉀8g/m3,放入耐熱耐腐蝕容器(陶罐或玻璃容器),后加入甲醛(40%)10ml/m3,熏蒸4小時以上。熏蒸時室內(nèi)濕度60%-80%。


3.清理污染物時:


嚴格遵循活病毒生物安全操作要求,采用壓力蒸汽滅菌處理,并進行實驗室換氣等,防止次生危害。

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