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化學(xué)發(fā)光試劑盒的使用方法有哪些？
化學(xué)發(fā)光試劑盒是一種超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒，本產(chǎn)品與二抗上偶聯(lián)的辣根過氧化物酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出螢光，從而可以通過用X光片壓片或其它適當(dāng)化學(xué)發(fā)光成像設(shè)備檢測(cè)樣品。
ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒是用于檢測(cè)HRP或其標(biāo)記產(chǎn)物的化學(xué)發(fā)光試劑，可用于western blot或ELISA等實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)。分為普通型ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（高質(zhì)量魯米諾底物，檢測(cè)靈敏度10-100pg HRP）和增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（采用更穩(wěn)定、發(fā)光量子產(chǎn)率更高的反應(yīng)底物，檢測(cè)靈敏度1pg HRP）。兩款試劑盒發(fā)光強(qiáng)度均可以穩(wěn)定持續(xù)30min以上。
化學(xué)發(fā)光試劑盒
原理：
超敏型ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以HRP標(biāo)記的抗體或探針結(jié)合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產(chǎn)品配制的ECL工作液中，室溫孵育數(shù)分鐘，HRP使工作液中的魯米諾（Luminol）氧化并發(fā)光，試劑中添加的增強(qiáng)劑可以使得這種發(fā)光大大增強(qiáng)。此光經(jīng)X光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質(zhì)或核酸條帶。
使用方法：
1.印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記的抗體或者HRP標(biāo)記的核酸探針孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物，檢測(cè)系統(tǒng)必須基于HRP酶標(biāo)記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對(duì)于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。
2.ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均勻并盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約1分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。
3.蛋白或核酸信號(hào)顯現(xiàn)：
1).用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；
2).將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；
3).用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光；
4).根據(jù)信號(hào)強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間，也可選擇不同時(shí)間多次曝光，以取得更佳效果。
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