即時檢測（Point-of-Care Testing，POCT）是一種在采樣現(xiàn)場進行的、利用便攜式分析儀器及配套試劑快速得到結(jié)果的檢測方式。由國家標準化管理委員會于2014年發(fā)布的國家標準《GB/T29790-2013 即時檢測質(zhì)量和能力的要求》中正式命名。 

POCT包括三個要素：一是“即時”，即快速檢測；二是“即地”，即在采樣現(xiàn)場進行，將試劑盒和一些手攜設(shè)備運送到病人身邊，省去標本在實驗室檢驗的復雜處理程序；三是操作者，POCT的操作者可以是非專業(yè)檢驗師，甚至是被檢測對象本人。

一、POCT在感染性疾病診斷中的應(yīng)用

（一）免疫學檢測

POCT應(yīng)用的免疫學技術(shù)主要是膠體金免疫層析技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、（電）化學技術(shù)、乳膠標記技術(shù)等，主要應(yīng)用于病原體的抗原和抗體檢測，病原體刺激機體產(chǎn)生細胞因子的檢測，快速時相反應(yīng)蛋白檢測和代謝產(chǎn)物毒素檢測等。

1．膠體金技術(shù)在病原體抗原抗體檢測中的應(yīng)用：

目前在臨床檢測中最常見的是膠體金檢測。膠體金免疫層析技術(shù)是以免疫層析技術(shù)、膠體金標記技術(shù)相結(jié)合的一種新型免疫學技術(shù)，其特點是單份測定、簡單快速，幾分鐘即可用肉眼觀察結(jié)果。該方法的優(yōu)點是簡單、快速、及時，缺點是靈敏度低，容易漏檢。膠體金法能夠直接檢測傳染病病原的抗原和抗體。

臨床應(yīng)用較廣的POCT抗原檢測包括：甲乙型流感抗原、呼吸道合胞病毒抗原（鼻咽部分泌物）、軍團菌抗原（尿）、隱球菌抗原、惡性瘧原蟲循環(huán)抗原和間日瘧原蟲抗原、班氏絲蟲抗原及利什曼原蟲抗原的檢測等。

POCT抗體檢測包括術(shù)前篩查項目[艾滋病病毒抗體（1+2）、梅毒螺旋體抗體、乙肝五項、丙肝抗體、乙型肝炎病毒表面抗原]，腎綜合征出血熱病毒抗體、乙型腦炎血清特異性抗體、單純皰疹病毒抗體、人巨細胞病毒IgM抗體、風疹病毒抗體、輪狀病毒抗體（糞便）、登革熱病毒抗體、淋球菌（分泌物）和泌尿生殖系沙眼衣原體（分泌物）、沙門菌血清抗體、抗幽門螺桿菌細胞毒素相關(guān)蛋白A抗體等，還能夠檢測弓形蟲抗體、包蟲體抗體、血吸蟲抗體、人囊蟲病等。

2．膠體金法在感染性疾病炎性指標中的應(yīng)用：

急性感染時膠體金法檢測CRP、降鈣素原、血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A protein，SAA）、白介素-6等。在診斷細菌或病毒感染時更加簡便快速，能夠滿足臨床即時檢測需求。SAA是細菌和病毒感染密切相關(guān)的標志物，其在判斷感染特別是病毒感染方面明顯優(yōu)于CRP和WBC，可作為早期感染的判別標志物。病毒感染后，SAA上升的幅度與病毒種類有關(guān)，SAA聯(lián)合CRP和WBC檢測能夠提高細菌或病毒感染診斷的可靠性。

3．其他POCT技術(shù)在感染性疾病免疫學檢測中的應(yīng)用：

免疫熒光技術(shù)分為直接免疫熒光和間接免疫熒光技術(shù)兩類，主要應(yīng)用于呼吸道病原體的抗原和抗體檢測，其優(yōu)點是直接在熒光顯微鏡下看到病原體，缺點是檢測時間長，需要熒光顯微鏡，要求人員有一定的形態(tài)學辨識能力。

電化學技術(shù)應(yīng)用于POCT病原體檢測，優(yōu)點是檢測病原體項目多（弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、巨細胞病毒抗體、單純皰疹病毒抗體等），靈敏度高。缺點是特殊人群假陽性率高（孕婦）。

乳膠標記技術(shù)主要應(yīng)用于病原體的抗原和抗體檢測，例如狂犬病、日本乙型腦炎、隱球菌抗原等，其優(yōu)點是快速，缺點是假陽性率高，容易發(fā)生非特異反應(yīng)。

（二）病原體核酸檢測

1．微流控芯片技術(shù)：

1990年微型全分析系統(tǒng)（miniaturized total analysis system，μTAS）的概念提出之后，微流控芯片是μTAS中當前最活躍的領(lǐng)域和發(fā)展前沿，它將分析實驗室功能轉(zhuǎn)移到芯片上，即芯片實驗室（lab-on-a-chip，LOC）。

微流控芯片技術(shù)可將化學和生物等領(lǐng)域中涉及的樣品制備、反應(yīng)、分析、檢測等基本操作單元集成到一塊幾平方厘米的芯上，具有試劑樣品用量少、分析速度快的優(yōu)點，用于床旁檢驗已受到廣泛關(guān)注。微流控芯片將核酸提取、擴增以及檢測整合到微流控芯片上，降低了檢測的復雜性，是目前絕大多數(shù)核酸POCT所采用的技術(shù)平臺。

微流控芯片在病原體檢測的應(yīng)用，臨床采用Roche Cobas Liat系統(tǒng)，檢測包括A/B型流感、A群鏈球菌和A/B型流感加呼吸道合胞病毒，只需要15~20 min。利用微流控芯片擴增EB病毒，僅需0.5 μl樣品，反應(yīng)體積僅需1 μl，靈敏度為3×105拷貝/ml。

Cooper等實現(xiàn)了白色念珠菌的快速分離檢測，相對于傳統(tǒng)的微生物真菌培養(yǎng)需要幾天的時間鑒定，該檢測僅需3 h就可檢出血液中低至1個/ml的病原菌，使感染者能夠及時得到恰當?shù)木戎?，提高患者生存率，希望隨著技術(shù)的改進，繼續(xù)縮短檢測時間。檢測HIV病毒，每張微流控芯片可同時檢測7份樣本，整個檢測過程在20 min內(nèi)完成，且準確率達100%。

微流控芯片技術(shù)不僅檢測速度快，而且操作簡單，將含蠟樣芽胞桿菌的標本加入微流控芯片后，裝置自動完成整個檢測流程，檢測靈敏度為細胞103~104個/ml。感染性疾病的分子診斷相對于細菌培養(yǎng)方法，在靈敏度、快速等方面均有顯著優(yōu)勢，目前微流控生物傳感器對感染性疾病的檢測已實現(xiàn)了多樣品來源如唾液、口腔上皮細胞、血漿等，檢測種類涵蓋多種細菌、真菌、病毒檢測。

Oblath等將除核酸提取步驟外的一整套檢測流程整合到微流控芯片上，并利用氧化鋁薄膜為實時PCR擴增過程提供溫度循環(huán)條件，實現(xiàn)唾液中多種口腔鏈球菌的分型檢測，快速準確，檢測靈敏度為8~12拷貝/μl。Cepheid公司的Xpert檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）對比常規(guī)細菌培養(yǎng)方法，大大地縮短了陰性結(jié)果的周轉(zhuǎn)時間，靈敏度和特異度都大大提高。

Xpert MTB/RIF可以直接從原始痰標本中快速、敏感地檢出結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性。WHO認可并推薦Xpert MTB/RIF在結(jié)核病防治規(guī)劃中的應(yīng)用。在非洲進行的一項多中心、隨機、對照試驗評估了Xpert MTB/RIF即時檢驗對結(jié)核病的可行性、準確性和臨床療效，結(jié)果顯示Xpert MTB/RIF可以在初級保健機構(gòu)由護士準確操作，由此可使更多的患者當天就開始治療，以縮短開始治療的時間。

核酸檢測的微流控芯片也在朝著高通量方向發(fā)展，一次檢測可以完成多種微生物鑒定、多種藥物敏感基因的分型。基于微流控技術(shù)實現(xiàn)人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）基因分型，能檢測和識別17個HPV高危型和7個HPV低危型。檢測限103拷貝數(shù)/L，某些型別甚至更低。

法國梅里埃Filmarray檢測平臺，能夠在單次反應(yīng)中對多種病原體核酸進行檢測，具有很高的靈敏度和特異度，幫助醫(yī)生對患者感染及早診斷和正確用藥。該產(chǎn)品目前具有上呼吸道感染（19種病毒和3種細菌）、胃腸道感染（13種細菌、5種病毒和4種寄生蟲）和腦膜炎/腦炎（6種細菌、7種病毒和1種真菌）等多種病原檢測試劑盒。

2．微流控芯片聯(lián)合等溫擴增技術(shù)：

將核酸擴增與微流控芯片技術(shù)聯(lián)用開展POCT檢測，但是如果現(xiàn)場檢測儀器不具備溫控系統(tǒng)則很難應(yīng)用于POCT檢測，而整合環(huán)介導等溫擴增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）可在恒溫條件下實現(xiàn)快速擴增，操作簡便快捷，更便于現(xiàn)場使用。

在DNA病毒檢測方面，Cai等采用逆轉(zhuǎn)錄LAMP檢測乙肝病毒，并采用常規(guī)分子生物學方法評價該法性能，檢出限為210 IU/ml。在RNA病毒檢測方面，Kurosaki等建立了逆轉(zhuǎn)錄LAMP法檢測馬爾堡病毒，靈敏度可達102拷貝/μl，該法可在40 min內(nèi)檢測出馬爾堡病毒。

Kurosaki等建立的針對扎伊爾型埃博拉病毒的檢測逆轉(zhuǎn)錄LAMP方法，在26 min內(nèi)即可檢測出20拷貝/μl的扎伊爾型埃博拉病毒，同時特異性較高，與親緣性較近的病毒核酸序列（如蘇丹型埃博拉和馬爾堡病毒等）沒有交叉反應(yīng)。在細菌檢測方面，采用LAMP技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌的試劑盒面市，該試劑盒檢測陽性痰液中結(jié)核菌的靈敏度為98.2%，直接檢測肺結(jié)核陽性患者的診斷靈敏度為88.2%，整個檢測過程在1 h內(nèi)完成，并且操作簡便，為基層POCT檢測提供了方便。

因此整合LAMP和微流控技術(shù)，以可控流體貫穿反應(yīng)過程，將多個操作平臺集成在一張芯片上，具有集成化和微型化的優(yōu)勢。

Alere流感A/B測試使用等溫擴增和分子信標探針技術(shù)，5 min完成鼻拭子標本的流感病毒A/B檢測?；谖⒘骺氐葴財U增技術(shù)的甲型H1N1流感病毒檢測，反應(yīng)體系3 μl，可在30 min內(nèi)完成檢測，最低檢測限可達10拷貝/μl。Ma等設(shè)計了一個集成、自驅(qū)動的微流控芯片用于數(shù)字LAMP反應(yīng)，整個檢測過程可以通過毛細作用力在芯片上自動完成，30 min對耐萬古霉素腸球菌菌株特異性基因進行擴增，檢測限僅為11個拷貝/μl。

3．納米孔測序技術(shù)：

納米孔測序技術(shù)也被公認為未來測序發(fā)展的一大方向。與以往的測序技術(shù)皆有不同，它不是通過檢測光、熒光信號顏色或pH來實現(xiàn)堿基序列的讀取，而是基于電信號的測序技術(shù)。蛋白質(zhì)納米孔（微型的小孔，其本質(zhì)是在膜上形成通道）被嵌入在合成膜上，并浸沒在電生理溶液中，使離子電流通過納米孔。

在像DNA或RNA這樣的分子通過納米孔時，會對電流帶來干擾，引起電流信號的特征性改變。在此過程中，信號被實時分析，用來確定正在通過該孔的DNA或RNA鏈的堿基序列。納米孔會分析通過它的整個DNA或RNA片段。

因此，在納米孔測序中，讀長長度與制備樣本中DNA或RNA的長度一致。用戶可以根據(jù)他們想要的實驗結(jié)果來選擇恰當?shù)臉悠分苽浞椒?，生成最適合的讀長長度。目前，使用標準的DNA提取方法已能夠獲得數(shù)萬到數(shù)十萬堿基的讀長，而由納米孔社區(qū)用戶設(shè)計的溫和提取法已獲得了超過2 000 000 bp的讀長。

納米孔技術(shù)提供的是動態(tài)、實時的測序，支持在幾分鐘內(nèi)就獲得病原體鑒定等時間關(guān)鍵型應(yīng)用的檢測結(jié)果。用戶可以在測序早期了解樣本的質(zhì)量和狀態(tài)，也可以在獲得足夠的數(shù)據(jù)后停止測序。

未來，快速的采樣到結(jié)果周轉(zhuǎn)時間在感染性疾病、實地動態(tài)監(jiān)測疫情暴發(fā)以及其他診斷方面具有巨大潛力。Kafetzopoulou等報道拉沙熱暴發(fā)，納米孔測序儀對36個基因組測序，拉沙熱病毒與前一年病原體存在系統(tǒng)發(fā)育混交，表明存在獨立的人畜共患的風險。

二、POCT在醫(yī)院各科室的需求情況

臨床檢驗需求的提升推動著POCT的發(fā)展，傳統(tǒng)檢驗方法雖然可以在檢驗標本量、自動化操作、結(jié)果精確度、性能穩(wěn)定性等方面滿足臨床檢驗要求，但在便攜性、檢測速度、檢驗流程復雜度等方面卻無法得以滿足。在家庭健康管理及基層醫(yī)療機構(gòu)檢驗方面，大型檢驗設(shè)備更是難以普及。我們以醫(yī)院市場為例，梳理了醫(yī)院部分科室對POCT產(chǎn)品的需求情況：

心血管內(nèi)科

可用于心臟損傷標記物檢測（包括:肌紅蛋白測定、肌鈣蛋白I測定、心型脂肪酸結(jié)合蛋白測定），心肌酶檢測（肌酸激酶-MB 測定），充血性心力衰竭的診斷（NT-proBNP測定），對心肌梗塞、心衰的早期診斷有重要意義。

呼吸內(nèi)科

可進行動脈血氣分析（包括：動脈血酸堿度、動脈血二氧化碳分壓、動脈血氧分壓、血漿實際碳酸氫鹽和標準碳酸氫鹽、動脈血二氧化碳總量、緩沖總堿、剩余堿、動脈血氧飽和度、乳酸）。還可用于甲型和乙型流感病毒測定，呼吸道合胞病毒抗原測定，對于“非典”和甲型禽流感病毒也可進行快速檢測。

消化內(nèi)科

可進行肝功能檢查（具體包括：血清酶學檢查、血清總蛋白、清蛋白測定、血清總膽紅素測定、血氨測定），胰腺外分泌功能檢查（淀粉酶測定），糞便隱血檢查（具體包括：便隱血檢測、便轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測）。

血液內(nèi)科

可進行血紅蛋白定量，紅細胞沉降率測定，血細胞計數(shù)，傳染性單核細胞增多癥測定，抗人球蛋白測定、人細小病毒B19測定等。通過簡單的床旁檢測，也可初步判斷患者是否需要及時輸血治療。

內(nèi)分泌科

可用于糖代謝紊亂檢查（具體包括：空腹血糖檢測、口服糖耐量試驗、糖化血紅蛋白測定、β-羥丁氨酸測定、乳酸測定），血脂代謝異常檢查（具體包括：總膽固醇測定、三酰甘油測定、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白測定），血液電解質(zhì)檢查（具體包括：鉀測定、鈉測定、氯測定、鈣測定、總二氧化碳測定、陰離子間隙），甲狀腺功能測定（具體包括：促甲狀腺激素、四碘甲狀腺原氨酸、游離T4、三碘甲狀腺原氨酸、游離T3測定），垂體激素測定（具體包括：促卵泡激素測定、黃體生成素測定），人絨毛膜促性腺激素檢測。

感染內(nèi)科

可進行細菌感染檢測（具體包括：快速C-反應(yīng)蛋白檢測、降鈣素原檢測、血清淀粉樣蛋白A檢測，結(jié)核桿菌檢測、幽門螺桿菌檢測、嗜肺軍團菌檢測，A 群鏈球菌測定、金黃色葡萄球菌測定、白色念球菌檢測），病毒感染檢測（具體包括：人類巨細胞病毒抗體測定、風疹病毒抗體檢測、單純皰疹病毒-II抗體檢測、人類輪狀病毒抗原的測定、腺病毒抗原測定、登革熱病毒抗體測定），寄生蟲感染檢測（具體包括：弓形蟲抗體檢測、惡性瘧原蟲檢測），病毒性肝炎感染檢測（具體包括：甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒），性傳播疾病檢測（具體包括：梅毒測定、HIV、淋球菌、沙眼衣原體）

腫瘤內(nèi)科

可診斷多種腫瘤標志物（具體包括：血管內(nèi)皮生長因子VEGF測定、甲胎蛋白測定、癌胚抗原測定、前列腺抗原測定、糖類抗原125測定、糖類抗原19-9測定、糖類抗原15-3測定測定、胃蛋白酶原測定、胃泌素17測定、S100蛋白測定）

泌尿科

可進行尿液常規(guī)分析（具體包括：尿液理學檢查、尿液化學檢查），腎小球濾過功能檢查（具體包括：血肌酐檢測、血尿素測定、血尿酸測定），腎小管功能檢測（β2微球蛋白測定、α1微球蛋白測定、視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）測定、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶NAG測定），早期腎損傷檢測（尿微量白蛋白測定、胱抑素C測定、中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白NGAL測定）。

婦產(chǎn)科

可用于TORCH-IgM 五項檢測、抗卵巢抗體檢測、抗透明帶抗體檢測、抗子宮內(nèi)膜抗體檢測、抗β-HCG的早孕檢測、人細小病毒B19檢測、沙眼衣原體檢測、解脲支原體檢測。

兒科

兒童與成人的就診方式不同，適合兒童的診斷行為需要輕便，易用，樣本需求量少，樣本無需預處理，快速得出結(jié)論等等。項目主要有呼吸道病原體檢測系列，像流感病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、腺病毒等；炎癥檢測系列，如CRP、SAA、PCT等。POCT 除了結(jié)果快速可靠外，父母還可以一直陪伴在孩子身邊，隨時了解孩子的病情，更好的與醫(yī)護人員交流，增強了治愈疾病的信心。

免疫內(nèi)科

可用于變態(tài)反應(yīng)性疾病檢查（具體包括：過敏原檢測、血清總IgE 測定、血清特異IgE 測定、食物不耐受檢測），自身免疫性疾病檢測（具體包括:類風濕因子檢測、抗雙鏈DNA 抗體檢測、抗可提取性核抗原抗體檢測、抗脫氧核糖蛋白抗體檢測、抗核抗體檢測、抗CCP檢測）。

普外科

常規(guī)凝血功能指標如PT、APTT、Fib、INR、血小板功能、D- 二聚體都能使用POCT 設(shè)備檢測，可以為急診手術(shù)患者節(jié)省時間。

ICU

POCT 檢測顯著縮短了檢測周轉(zhuǎn)時間，贏得了對急診重癥患者的治療決策時間。急診患者的入院前處理關(guān)系到患者的搶救與恢復。  

河南美凱生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、貿(mào)易于一體的具有獨立法人資格的新型現(xiàn)代化醫(yī)療器械企業(yè)，公司產(chǎn)品主要涉及血培養(yǎng)瓶,化學發(fā)光試劑,胃蛋白酶原試劑盒,院感監(jiān)測試劑等系列產(chǎn)品，且均已取得醫(yī)療器械注冊證。公司占地面積15000平方米，GMP標準廠房3000平方米，專業(yè)性研發(fā)實驗室1000平方米，先后被授予國家高新技術(shù)企業(yè)、河南省工程實驗室、河南省體外診斷試劑工程技術(shù)研究中心等榮譽稱號。企業(yè)實力雄厚，重信用、守合同、保證產(chǎn)品質(zhì)量，以多品種獨特經(jīng)營的原則，贏得了廣大客戶的信任。垂詢電話0395-3333801。

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