2017 年6 月，原國家食品藥品監(jiān)督管理總局正式加入ICH。為鼓勵藥品創(chuàng)新，推動藥品注冊技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與國際接軌的進(jìn)程，加快藥品審評審批時效，加強(qiáng)藥品全生命周期管理，原國家食品藥品監(jiān)督管理總局于2018 年1 月發(fā)布《關(guān)于使用國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會二級指導(dǎo)原則的公告( 2018 年第10 號) 》［1］，明確自2018 月2 月1 日起，治療用生物制品1 類和預(yù)防用生物制品1 類注冊申請適用《M4: 人用藥物注冊申請通用技術(shù)文檔( CTD) 》，為國內(nèi)外生物制品上市申請申報資料提出了統(tǒng)一規(guī)范并與國際接軌的要求。

但由于目前生物制品研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)研發(fā)管理水平參差不齊，對法規(guī)、技術(shù)指導(dǎo)原則和審評要求理解不到位，造成上市申請申報資料的完整性、規(guī)范性較差，普遍存在需要多次發(fā)補(bǔ)和多輪溝通的情況。

本文結(jié)合我國2007 年《藥品注冊管理辦法》附件3 生物制品申報資料要求( 簡稱2007版法規(guī)要求) 和ICH M4Q 指導(dǎo)原則要求，以及近年的審評工作經(jīng)驗，梳理了生物制品上市申請藥學(xué)申報資料的主要問題和審評關(guān)注要點，以期幫助申請人提高申報資料質(zhì)量，進(jìn)一步提高審評效率，減少不必要的多次發(fā)補(bǔ)。

1、總體問題

自2018 年2 月1 日正式實施ICH M4 指導(dǎo)原則之后，國內(nèi)外治療類和預(yù)防類1 類生物制品均按照CTD 格式進(jìn)行申報，其他類別大多數(shù)申請仍按照2007 版法規(guī)要求進(jìn)行申報。藥學(xué)申報資料總體上均存在完整性和規(guī)范性的問題。

1.1   完整性

完整性問題包括申報資料缺項和研究工作缺項。申報資料缺項是指未提交完整資料，最常見的是缺少某些證明性文件、制造和檢定記錄不完整、缺少工藝驗證報告及關(guān)鍵圖譜以及制檢規(guī)程缺少關(guān)鍵信息等。

研究工作缺項包括生物源性材料缺少安全性評估、缺少臨床期間變更信息以及可比性研究資料、工藝驗證不全面、雜質(zhì)研究不充分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定缺乏合理性依據(jù)、穩(wěn)定性研究考察條件及考察項目不全面或包材相容性研究不全面等。個別申報資料過于簡略，只有總結(jié)概述，缺少具體研究方法、研究數(shù)據(jù)和分析，基本不具備可評價性。

1．2 規(guī)范性

規(guī)范性問題，一是相關(guān)研究資料沒有放在該放的位置，格式不規(guī)范，資料整體的邏輯性較差; 二是前后表述不一致，主要體現(xiàn)在生產(chǎn)廠或生產(chǎn)地址、術(shù)語、縮略詞等，特別需要關(guān)注在申請表、申報資料的不同章節(jié)、制檢規(guī)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書等文件中生產(chǎn)廠和生產(chǎn)地址的表述保持一致; 如果有縮略詞，建議在每章前面提供縮略詞列表，以方便審評人員理解和查詢; 三是翻譯不準(zhǔn)確、不專業(yè)、可讀性差，如將“SDS-PAGE”翻譯為“SDS-頁碼”，將“cellbank”翻譯為“細(xì)胞銀行”等。這些錯誤或不規(guī)范會影響審評人員對申請人研發(fā)水平和申報資料質(zhì)量的整體印象和評價。

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2、常見突出問題和審評關(guān)注要點

2．1 生產(chǎn)用原材料

生物制品生產(chǎn)過程中使用的各種原材料來源復(fù)雜，可能引入外源因子或毒性化學(xué)材料，應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，但申報資料中常見生產(chǎn)用原材料質(zhì)量控制和安全性風(fēng)險評估資料不充分或不完善，如未明確生產(chǎn)過程中所用的動物源性材料并評估其安全性風(fēng)險，包括引入外源因子的風(fēng)險。

另外，對于生產(chǎn)中所用的關(guān)鍵原材料，包括蛋白酶、親和抗體、化學(xué)偶聯(lián)物等，如果從外部購買，應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的供應(yīng)商審計，并明確質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn); 如果是自行制備，在申報資料中還需提供生產(chǎn)工藝、質(zhì)量研究和穩(wěn)定性研究等內(nèi)容。建議按照《中華人民共和國藥典》“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”的要求對生產(chǎn)中所用的原材料進(jìn)行全面風(fēng)險評估和質(zhì)量控制［2］。

在上市申請時，還需要在資料中明確臨床期間生產(chǎn)用原材料是否發(fā)生過變更以及開展了哪些變更研究和評估。

2．2 上游構(gòu)建和細(xì)胞庫建立

工程菌或工程細(xì)胞是生產(chǎn)生物制品的基礎(chǔ)，是最重要的生產(chǎn)起始種子原材料。上市申請時應(yīng)提供完整的上游構(gòu)建資料，說明目的基因來源、設(shè)計、進(jìn)行了哪些優(yōu)化，如改構(gòu)或位點突變，并提供合理性依據(jù)，提供測序結(jié)果以及與理論序列的對比結(jié)果; 提供表達(dá)載體的名稱、來源、結(jié)構(gòu)、遺傳特性; 提供宿細(xì)胞或宿主菌名稱、來源、培養(yǎng)特性、生物學(xué)特性、傳代歷史( 包括馴化過程) 和檢定結(jié)果等，如果對宿主細(xì)胞或宿主菌有改構(gòu)，也應(yīng)該提供相關(guān)資料; 種子庫和/或細(xì)胞庫的建立和檢定應(yīng)符合ICH Q5B，Q5D 指導(dǎo)原則和《中華人民共和國藥典》的要求，明確種子庫傳代及建庫過程、建庫規(guī)模、限傳代次、保存方法、保存地點以及使用壽命的評估。需要特別關(guān)注以下幾個問題。

表達(dá)載體抗性基因選擇: 《中華人民共和國藥典》明確要求: 除另有規(guī)定外，不得使用β-內(nèi)酰胺類抗生素［2］，但在審評過程中發(fā)現(xiàn)仍有部分原核表達(dá)產(chǎn)品選擇氨芐抗性并在建庫和種子擴(kuò)增階段添加氨芐青霉素，為降低使用β-內(nèi)酰胺類抗生素帶來的風(fēng)險( 包括排放相關(guān)的環(huán)境污染和制品中殘留引起患者過敏的風(fēng)險) ，在早期構(gòu)建載體時應(yīng)盡量避免使用此類抗性基因，如果產(chǎn)品已進(jìn)入臨床階段，應(yīng)在關(guān)鍵臨床前開展研究替換為非β-內(nèi)酰胺類抗生素抗性質(zhì)粒，重新構(gòu)建工程菌并進(jìn)行可比性研究。

建庫不規(guī)范: 審評中發(fā)現(xiàn)，部分生產(chǎn)企業(yè)沒有嚴(yán)格遵從《中華人民共和國藥典》及相關(guān)指導(dǎo)原則要求，在建庫過程中存在劃平板、挑克隆、挑取部分菌體以及側(cè)傳代等操作。穩(wěn)定表達(dá)克隆或細(xì)胞株的篩選及單克隆化操作應(yīng)在建庫之前完成，在制備主細(xì)胞庫( master cell bank，MCB) 和工作細(xì)胞庫( workingcell bank，WCB) 過程中不得進(jìn)行單克隆篩選，以避免由于個別基因突變引起WCB 中細(xì)胞群體性的遺傳特性改變［3］，從原始種子傳代和擴(kuò)增后保存為主種子批，從主種子批傳代和擴(kuò)增后保存的為工作種子批，工作種子批的生物學(xué)特性應(yīng)與原始種子一致［2］。

傳代穩(wěn)定性研究不規(guī)范: 傳代穩(wěn)定性研究應(yīng)模擬實際生產(chǎn)條件( 如擴(kuò)增和生產(chǎn)階段加壓或不加壓，傳代周期、培養(yǎng)表達(dá)工藝條件等) 、考察細(xì)胞水平、基因水平以及蛋白水平的穩(wěn)定性，明確生產(chǎn)限傳代次，特別需要注意的是上市申請時應(yīng)評估已開展的傳代穩(wěn)定性研究能否滿足商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)需求［3］。

2．3 生產(chǎn)工藝

由于生物制品的制備過程較復(fù)雜，大部分類別的生物制品分子結(jié)構(gòu)尚不能完全表征，為保證產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，系統(tǒng)深入的工藝開發(fā)和工藝研究、全面的工藝驗證顯得尤為重要。在上市申請藥學(xué)申報資料中，生產(chǎn)工藝部分最突出的問題是工藝驗證不充分、不規(guī)范以及缺少臨床期間的變更信息和可比性研究資料。

工藝驗證資料不充分、不規(guī)范主要體現(xiàn)在:① 驗證規(guī)模和工藝不具有代表性。② 驗證方案中驗收標(biāo)準(zhǔn)不明確。③ 僅對工藝操作參數(shù)進(jìn)行驗證，缺少對過程控制水平和工藝性能的評估和驗證。④ 缺乏全生命周期管理和持續(xù)工藝驗證的意識。提交上市申請時，應(yīng)采用商業(yè)化規(guī)模、代表性工藝和批次( 至少連續(xù)3 批) ，盡可能考察工藝最差條件開展工藝驗證，以確認(rèn)擬上市工藝的穩(wěn)健性。

上游培養(yǎng)工藝驗證應(yīng)關(guān)注細(xì)胞形態(tài)、生長特性、密度、活率、代謝情況、目的產(chǎn)物表達(dá)情況、體外細(xì)胞壽命限度等; 純化工藝驗證應(yīng)關(guān)注純度、活性、收率、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)去除能力等; 對于化學(xué)偶聯(lián)修飾的產(chǎn)品還應(yīng)關(guān)注修飾度、游離修飾基團(tuán)、未偶聯(lián)蛋白比例、修飾偶聯(lián)對蛋白質(zhì)量的影響、收率等; 制劑工藝驗證應(yīng)關(guān)注原液凍融、混合、除菌過濾、無菌灌裝、凍干工藝等; 在這部分還應(yīng)提供中間體暫存、層析介質(zhì)清潔/儲存/再生和循環(huán)使用壽命驗證、過濾器清潔/儲存/壽命驗證、一次性細(xì)胞培養(yǎng)袋/儲液袋相容性評價、過濾器/管道提取物相容性評價、運(yùn)輸驗證等［4］。

生產(chǎn)工藝開發(fā)或臨床期間變更部分，對于闡述擬上市工藝和產(chǎn)品與已通過臨床試驗驗證的產(chǎn)品之間的相關(guān)性具有非常重要意義。

這部分也是上市申請申報資料中問題最多、最常被發(fā)補(bǔ)的內(nèi)容。從通行的國際管理方式看，在確保產(chǎn)品質(zhì)量特性沒有發(fā)生變化的前提下，新藥臨床試驗早期允許發(fā)生必要的工藝和規(guī)模變更，但在開展關(guān)鍵性臨床( Ⅲ期) 研究前應(yīng)確定擬上市規(guī)模和工藝，在Ⅲ期臨床研究以后、注冊上市申報前，應(yīng)盡量避免發(fā)生變更; 如果確實需要發(fā)生變更，應(yīng)盡早開展變更研究以便將變更后的產(chǎn)品用于關(guān)鍵性臨床［5］。

在上市申請申報資料中應(yīng)明確從工藝開發(fā)開始至擬定的商業(yè)化工藝為止各個階段的批次信息( 批號、用途、規(guī)?；蚺?、生產(chǎn)設(shè)備、工藝路線、工藝參數(shù)、制劑處方、輔料、包裝容器、生產(chǎn)地點與日期) 以及主要變化，提供合理變更依據(jù)以及相關(guān)的支持性驗證研究資料，包括各階段生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量的可比性研究資料，評價變更對產(chǎn)品質(zhì)量的影響以及擬上市商業(yè)化工藝批次與關(guān)鍵臨床批次工藝及產(chǎn)品之間的可比性/可代表性［6］。

原則上，擬上市產(chǎn)品質(zhì)量不能低于臨床批次產(chǎn)品質(zhì)量，如果可比性研究觀察到差異，應(yīng)對差異原因及其對產(chǎn)品安全性和有效性的影響進(jìn)行深入分析，根據(jù)差異性程度和風(fēng)險性大小，必要時需開展進(jìn)一步的非臨床或臨床研究證實。

2．4 質(zhì)量研究

質(zhì)量研究和質(zhì)量控制包括采用適宜的方法對產(chǎn)品進(jìn)行鑒定、生物活性、純度和雜質(zhì)等分析，以及采用參比品和經(jīng)驗證的方法評估已知和潛在的產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)和雜質(zhì)。這部分資料的主要問題有對結(jié)構(gòu)復(fù)雜蛋白質(zhì)及化學(xué)偶聯(lián)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證研究不充分; 對雜質(zhì)和相關(guān)物質(zhì)的研究不充分; 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定缺乏合理的擬定依據(jù); 對照品信息不全面等。

結(jié)構(gòu)確證和特性鑒定部分應(yīng)明確研究批次、批次來源( 如場地、工藝、階段等) ; 結(jié)合多種手段對樣品進(jìn)行全面解析和理化性質(zhì)研究，包括一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)和翻譯后修飾等，需特別關(guān)注對翻譯后修飾的深入研究; 對于化學(xué)偶聯(lián)修飾的制品，還應(yīng)對修飾位點進(jìn)行確證，對修飾基團(tuán)/蛋白比例、修飾度進(jìn)行分析; 生物學(xué)活性研究應(yīng)包括親和力、結(jié)合活性、基于動物/體外細(xì)胞的生物學(xué)活性等，生物學(xué)活性分析方法最好能反映產(chǎn)品的預(yù)期作用機(jī)制和作用特點。

產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)或雜質(zhì)包括分子大小變體、電荷變體、疏水性變體、結(jié)構(gòu)變體、翻譯后修飾變體等，應(yīng)對雜質(zhì)或相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析，并評價其對產(chǎn)品安全、有效性的影響。工藝相關(guān)雜質(zhì)包括宿主細(xì)胞蛋白、宿主DNA、色譜配基、細(xì)菌內(nèi)毒素、工藝添加物( 包括胰島素、篩選試劑、抗生素、消泡劑、有機(jī)溶劑、蛋白酶、活化試劑、偶聯(lián)試劑等) ，應(yīng)分析生產(chǎn)工藝是否可將相關(guān)雜質(zhì)去除或降低至可接受水平，制定限度標(biāo)準(zhǔn)并提供依據(jù)。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面常見的問題是缺乏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定依據(jù)，擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時應(yīng)綜合考慮原輔料控制、工藝控制、檢測方法驗證、多批次檢測結(jié)果、穩(wěn)定性、統(tǒng)計分析、藥典通用標(biāo)準(zhǔn)、相關(guān)產(chǎn)品的基本控制要求等因素，并且應(yīng)與非臨床及臨床研究批次相關(guān)聯(lián)［7］。

還應(yīng)在資料中明確臨床研究期間質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)變更的情況，包括變更內(nèi)容、變更原因、變更依據(jù)及比對研究資料; 如果分析方法發(fā)生變更，應(yīng)進(jìn)行變更前后分析方法的橋接研究和比對研究。如果申報產(chǎn)品為藥典收載品種，或有已上市同類品種，應(yīng)與藥典標(biāo)準(zhǔn)或已上市產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。

對照品方面，應(yīng)提供不同開發(fā)階段的參考品或?qū)φ掌返脑敿?xì)信息，包括批次來源、制備方法或過程、檢定項目和結(jié)果、標(biāo)定方法和結(jié)果、儲存和復(fù)驗等，應(yīng)關(guān)注對照品的代表性、可溯源性和可及性。

2．5 穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性是評價藥品有效性和安全性的重要指標(biāo)之一，穩(wěn)定性研究是確定藥品貯藏條件和使用期限的主要依據(jù)，也可以為藥品的生產(chǎn)、包裝、運(yùn)輸條件等提供科學(xué)依據(jù)［8］。穩(wěn)定性研究資料部分較突出的問題有穩(wěn)定性考察樣品不具有代表性、考察條件和項目不全面、對結(jié)果的分析不到位等。

研究樣品的代表性: 在上市申請時，穩(wěn)定性研究樣品應(yīng)為擬上市商業(yè)化規(guī)模工藝生產(chǎn)的樣品，內(nèi)包材應(yīng)與實際貯藏時所用的包材一致。還應(yīng)關(guān)注對臨床批次樣品進(jìn)行穩(wěn)定性考察。在資料中應(yīng)明確考察批次的批號、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)地點、規(guī)模/批量、工藝版本、包裝等。

考察條件不全面: 常見問題為缺少強(qiáng)制條件研究、運(yùn)輸穩(wěn)定性研究、使用過程中穩(wěn)定性研究。

強(qiáng)制條件或影響因素試驗，目的在于了解產(chǎn)品對外界環(huán)境的敏感性，理解產(chǎn)品的降解途徑和內(nèi)在穩(wěn)定性，在產(chǎn)品可比性研究中，采用強(qiáng)制降解可以在較短時間內(nèi)觀察到產(chǎn)品質(zhì)量的變化，便于分析產(chǎn)品在質(zhì)量和性質(zhì)等方面的異同; 運(yùn)輸穩(wěn)定性研究目的是確認(rèn)產(chǎn)品在運(yùn)輸過程中處于擬定的保存條件下可以保持產(chǎn)品的穩(wěn)定性，并評估產(chǎn)品在短暫的脫離擬定保存條件下對產(chǎn)品質(zhì)量的影響; 對于需要復(fù)溶、稀釋或配制、混合或多次使用的產(chǎn)品，應(yīng)開展相應(yīng)的穩(wěn)定性研究，以評估實際使用情況下產(chǎn)品的穩(wěn)定性?？疾祉椖繎?yīng)全面，重點關(guān)注產(chǎn)品敏感的且有可能反映產(chǎn)品質(zhì)量、安全性和/或有效性的項目［8－9］。

對考察結(jié)果分析需重點關(guān)注穩(wěn)定性變化趨勢和降解途徑的分析。如果臨床期間發(fā)生變更，應(yīng)提供臨床批次與擬上市批次穩(wěn)定性可比性研究資料。

2．6 包裝系統(tǒng)及相容性研究

包裝系統(tǒng)也是藥品的重要組成部分，特別是直接接觸藥品的內(nèi)包材的質(zhì)量會直接影響藥品的質(zhì)量。申報資料中常見問題是包材相容性研究不規(guī)范，缺少原液/原料藥與包裝系統(tǒng)的相容性研究資料。

在選擇包裝容器時應(yīng)關(guān)注其對藥品的保護(hù)性、功能性、安全性和相容性，如包材對蛋白質(zhì)的吸附、膠塞有可能產(chǎn)生的微粒、玻璃容器產(chǎn)生玻璃脫片等問題，應(yīng)按照相關(guān)指導(dǎo)原則要求開展規(guī)范的包材相容性研究。

另外，目前生物制品原液常采用一次性儲液袋包裝儲存，但申報資料中常缺少包裝容器與產(chǎn)品的相容性研究資料，或僅提供供應(yīng)商開展的有限相容性研究資料。一般情況下，供應(yīng)商開展研究時采用的樣品無法完全代表特定的申報產(chǎn)品，申請人需采用代表性的自制樣品進(jìn)行規(guī)范的包材相容性研究，供應(yīng)商提供的數(shù)據(jù)和信息可作為支持性資料。

2．7 外源因子安全性評估

外源因子的安全性是生物制品最需關(guān)注的安全性考量之一，它貫穿生物制品的整個生產(chǎn)過程，從生產(chǎn)用原材料、細(xì)胞基質(zhì)、細(xì)胞庫到生產(chǎn)過程控制和工藝驗證。

尤其是對于采用人源或動物源性材料制備的制品，除了對原材料進(jìn)行風(fēng)險評估和質(zhì)量控制，對細(xì)胞系和細(xì)胞庫進(jìn)行全面的外源性因子檢定，對于特定嚙齒類細(xì)胞( 如CHO，BHK21，NS0 和Sp2 /0) ，還應(yīng)確定其未加工收獲液中病毒顆粒的量及其是否具有感染性逆轉(zhuǎn)錄病毒; 病毒清除研究中，應(yīng)關(guān)注選擇合適的模型病毒，采用縮小規(guī)模的工藝模型進(jìn)行病毒滅活/清除驗證，并證明縮小模型可代表商業(yè)化規(guī)模工藝; 試驗樣品應(yīng)具有代表性，并明確能有效去除或滅活病毒的生產(chǎn)步驟; 結(jié)合未加工收獲液中病毒檢測結(jié)果和整個工藝的病毒去除/滅活能力，綜合評價終產(chǎn)品的安全性［2， 10］。

2．8 制檢規(guī)程和制檢記錄

申報上市申請時，按照目前注冊管理辦法的要求，需提交制檢規(guī)程和商業(yè)化規(guī)模連續(xù)3 批樣品的制檢記錄。由于生物制品的結(jié)構(gòu)和組成較為復(fù)雜，生產(chǎn)工藝和過程控制對其質(zhì)量影響非常大，僅依據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對生物制品進(jìn)行質(zhì)量判斷和監(jiān)管存在較大的風(fēng)險，因此應(yīng)依據(jù)目前的法規(guī)要求、參照現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》通則、總論、各論相關(guān)要求，并結(jié)合實際生產(chǎn)工藝和檢定要求擬定制檢規(guī)程，一般分為: 基本要求、制造部分、檢定部分、保存及運(yùn)輸和有效期、生產(chǎn)地址。制檢規(guī)程作為批準(zhǔn)文件的一部分，具有技術(shù)性標(biāo)準(zhǔn)的法規(guī)效力，也是現(xiàn)場檢查的重要依據(jù)，并且在生物制品上市后監(jiān)管中發(fā)揮重要作用。

結(jié)語

申報資料作為藥品研發(fā)、生產(chǎn)、質(zhì)量控制及生命周期管理不可或缺的重要文件載體，它的質(zhì)量對審評效率和審評質(zhì)量也有非常大的影響。

隨著CTD和eCTD 在我國的推進(jìn)和實施，申報資料的要求也會更加科學(xué)化、規(guī)范化，希望監(jiān)管機(jī)構(gòu)和業(yè)界共同努力，不斷促進(jìn)和提高我國生物制品的研發(fā)和申報水平，使有臨床價值的藥品盡快上市，以最大限度滿足患者用藥需求。